"La replicación "in vitro" del ADN: fundamentos y técnicas: 'Lo que nunca pensaste que podrías querer saber sobre el DNA y la PCR (y por IRC)" 7 de Mayo de 1997 > 4 ATENCION > Vamos a dar comienzo, según lo previsto...la charla coloquio > titulada "La replicación "in vitro" del ADN: fundamentos y técnicas: 'Lo que nunca pensaste que podrías querer saber sobre el DNA y la PCR (y por IRC)" > 4- Imparten Dña. Adela Torres, bióloga de Valencia y D. Ángel Martín Alganza, del Max-Planck-Institut > Bueno.. esta charla amplifica la de ayer..... > que impartió la Dra Mindyc Clyne Genetista. Epidemióloga. Center for Disease Control. New York State Department of Health. USA. > 4 La charla se desarrolla como sigue... > 4 La Dra Torres... va a desarrollar la parte teórica del asunto a tratar: como se realizan y cual es al utilidad de la técnica PCR > luego.. se abrirá un coloquio..... > para que participen comentando o exponiendo sus dudas, cuenstiones, observaciones cuantos quieran... > y finalmente el texto de ambas charlas, la de anoche y la de hoy podrán consultarse en la web. > Les dejo con Dña A. Torres... y con D. A. Martín Alganza.... > por favor.. cuyando quieran [19:26] Ejem, ejem... ¿Se me oye bien por el micro?... Bueno, vale, me pondré seria para variar. [19:26] Buenas tardes a todos y a todas y bienvenidos a este roll... digooo, a esta fascinante introducción a una de las técnicas más potentes y útiles de los últimos años en el campo de la Biología Molecular, entre otros. [19:26] Me presento brevemente diciendo que mi nombre es Adela Torres, y soy licenciada en Biología especialidad Bioquímica por la Universidad de Valencia (España). [19:26] He trabajado en el campo de la Genética Molecular del Desarrollo, la Biología Molecular y (actualmente) la secuenciación de ADN a gran escala. [19:26] Esta charla tiene como tema la PCR, o Reacción en Cadena de la Polimerasa. [19:26] Voy a tratar de ser lo más clara y concisa posible; no se trata de daros TODOS los datos sobre PCR y replicación "in vitro" de ADN, sino de dar unas nociones generales, tiempo habrá después para que quien esté interesado pueda profundizar más. [19:27] Como la idea es que esta charla sea medianamente amena, puede que a algunos os resulte bastante básica o incluso pueril; pido disculpas por anticipado. [19:27] Tenemos un objetivo: explicar qué es la PCR y para qué se usa actualmente en Biología Molecular y otros campos relacionados. [19:27] Empezaremos hablando un poco del sustrato sobre el que se utiliza la PCR: el ADN. [19:27] El ADN es el ácido desoxirribonucl eico, una sustancia química que se encuentra en el núcleo de las células formando los cromosomas. [19:27] Por tanto, el ADN es el vehículo en el que nuestro genes están codificados. [19:27] La molécula del ADN es larga y lineal, polimérica: tiene una estructura en forma de doble hélice a derechas (algo así como dos muelles de colchón juntos, por dar una idea gráfica). [19:27] Si "estirásemos" una de estas moléculas hasta que perdiera la forma helicoidal y la pusiéramos plana sobre una mesa, de modo que pareciera una escalera de mano, veríamos mejor su estructura química. [19:27] Los laterales de la escalera (el "esqueleto" de la molécula) son una sucesión de moléculas de azúcar (pentosa) y grupos fosfato, pero esto no nos interesa para el tema que estamos tratando. [19:27] Los "peldaños" de esta escalera están formados por moléculas de bases púricas y pirimidínicas que se designan por las letras A, G, C y T. [19:28] Estas bases se emparejan SIEMPRE DE LA MISMA MANERA: LA A SIEMPRE SE EMPAREJA CON UNA T Y LA G CON UNA C (y viceversa). [19:28] Es decir: una cadena de ADN estará formada por un esqueleto polimérico de azúcar-fosfato; y a cada monómero azúcar-fosfato estará unida una de las 4 bases. [19:28] La otra cadena de ADN tendrá las bases complementarias para poder unirse y formar una molécula de doble cadena. [19:28] Por ejemplo: si en una cadena vemos que las cinco primeras bases son ATGGCA, en la cadena complementaria las cinco primeras bases son TACCGT. [19:28] Cada base se une a su complementar ia mediante enlaces químicos débiles llamados puentes de hidrógeno. [19:28] La suma de todos esos enlaces posibilita que ambas cadenas permanezcan unidas adoptando la estructura de doble hélice a derechas que he mencionado antes. [19:28] Me he extendido un poco hablando de la estructura del ADN, pero porque es fundamental para entender el principio de la PCR. [19:28] La característica clave del ADN es su capacidad de autorreplicación: si tuviéramos una sola de las dos cadenas que componen la molécula, podríamos usarla como molde para construir la otra. [19:29] Como es lógico, si conocemos una de las bases, conocemos su complementaria en la otra cadena. [19:29] Sólo necesitamos los "ladrillos" necesarios para construir la nueva cadena... y dos o tres cositas más ;) [19:29] Este proceso se realiza "in vivo" durante la replicación y reparación del ADN, y requiere la acción de una compleja maquinaria de enzimas y factores proteicos. [19:29] La enzima clave es una proteína llama ADN-polimerasa, que puede obtenerse en grandes cantidades a partir de determinados tipos de bacterias. [19:29] Unas ligeras modificaciones permiten que esta proteína sea capaz de llevar a cabo la replicación del ADN en un tubo de ensayo. [19:29] ¿Cómo podemos replicar ADN en un tubo de ensayo? Veámoslo... [19:29] Supongamos que tenemos una muestra de ADN en un tubo. [19:30] Lo que habrá en el tubo será una suspensión de muchas moléculas de ADN, todas ellas de una longitud determinada e idéntica secuencia. [19:30] Mientras el ADN conserve su estructura de doble hélice no se puede replicar, así que necesitamos que pierda dicha estructura. [19:30] Una manera fácil de conseguirlo es calentarlo a unos 95 ºC, con lo cual ambas cadenas hermanas se separan. [19:30] Añadimos ahora a la disolución lo que se llaman "primers" o "cebadores". [19:30] Los cebadores son secuencias cortas de ADN (de 15-30 "letras" de longitud) complementarias a los extremos de cada una de las cadenas de la molécula de interés. [19:30] Añadimos también una de estas ADN polimerasas (hay muchos tipos comercializados actualmente) y los "ladrillos" (nucleótidos) necesarios para conseguir una nueva cadena. [19:30] La polimerasa se unirá al conjunto de ADN+primer y empezará a sintetizar una nueva cadena usando como molde la cadena desnaturalizada del ADN. [19:30] Como material de construcción usará los nucleótidos que le hemos proporcionado. [19:31] Ahora pensemos matemáticamente: nuestra molécula original (de cadena doble) se ha escindido en las dos cadenas que la componen, cada una de las cuales ha generado una cadena "hija". [19:31] Por tanto ahora, en lugar de 1 molécula de ADN de doble cadena, tenemos 2. [19:31] Pero originalmente no teníamos 1, sino muchísimas moléculas. [19:31] Sea cual sea la cantidad inicial de ADN en el tubo de ensayo, tras efectuar todo el proceso la hemos duplicado. [19:31] Esto que acabamos de ver es la reacción que efectúa la polimerasa... Y precisamente "PCR" son las siglas en inglés de Reacción en Cadena de la Polimerasa (Polimerase Chain Reaction). [19:31] Pero... ¿por qué "en cadena"? [19:31] Muy sencillo: porque cada una de las nuevas moléculas generadas es una molécula de ADN perfectamente funcional. [19:32] Por tanto, si hemos puesto suficientes nucleótidos y cebadores y nuestra polimerasa sigue activa, tenemos la posibilidad de repetir el ciclo. [19:32] Y ESTO ES LO QUE HACE LA PCR: repetir el proceso que acabo de describiros un número determinado de veces. [19:32] En cada ciclo, la cantidad de ADN se duplica. [19:32] Haciendo cálculos, si hubiéramos partido de 1 molécula de ADN originalmente y repitiéramos el proceso 30 veces, obtendríamos... 1, 2, 4, 8, 16, 32... ejem, 1.073.741.824 moléculas. Que se dice pronto. [19:32] Esto es, ni más ni menos, la PCR. [19:32] Actualmente la PCR se lleva a cabo en unos aparatos llamados "termocicladores", que lo que hacen es calentar y enfriar alternativamente el tubo con la muestra. [19:32] El control de la temperatura es crítico para la buena marcha de la reacción. [19:33] Altas temperaturas del orden de 95 ºC separan las cadenas del ADN. [19:33] Para que se unan los cebadores se necesitan temperaturas del orden de 50-60 ºC (esto depende mucho de la secuencia del cebador). [19:33] Las polimerasas que se usan en la PCR para generar las nuevas cadenas tienen temperaturas óptimas que rondan los 70 ºC. [19:33] Así que se necesita un aparato capaz de subir y bajar la temperatura de la muestra con gran precisión y rapidez para tener un buen control del proceso. [19:33] RESUMIENDO: LA PCR PERMITE OBTENER MUCHAS COPIAS DE UNA MISMA MOLÉCULA DE ADN A PARTIR DE UNA CANTIDAD INICIAL MUY PEQUEÑA. [19:33] Si viéramos a algún valiente investigador haciendo una PCR, no veríamos nada espectacular, pero sí interesante: [19:33] El investigador añadiría todos los productos necesarios para la PCR en el tubo que contiene el ADN en suspensión. [19:33] Luego le veríamos poner ese tubo en un termociclador (que suelen tener pinta de yogurteras futuristas) y activaría su programa favorito. [19:34] Quizá usaría un programa parecido a este: [19:34] Paso 1: 5 minutos a 95 ºC (para la desnaturalización inicial del ADN de la muestra) [19:34] Paso 2: 30 segundos a 95 ºC (para desnaturalizar ya dentro de los ciclos) [19:34] Paso 3: 30-45 segundos a 55-65 ºC (para posibilitar la unión de los cebadores al ADN molde) [19:34] Paso 4: 60 segundos a 70-72 ºC (para que la polimerasa empiece a actuar y genere nuevas cadenas de ADN) [19:34] Paso 5: Repetición 30 veces de los pasos 2 al 4 inclusive (volvería a desnaturalizar, a unir los primers, etc...) [19:34] Paso 6: Tras los 30 ciclos, refrigera la muestra o bien termina el programa, o enlaza con otro programa. [19:35] En el Paso 5 es donde se ve la potencia de la PCR para "amplificar" (aumentar el número de copias) del ADN. [19:35] Cada vez que el programa vuelve atrás y llega al paso 2, los cebadores se encuentran muchas más cadenas molde a las que unirse. [19:35] Por tanto, cada vez se generan más cadenas hijas. [19:35] La utilización masiva de la PCR estuvo condicionada al desarrollo y comercializac ión de polimerasas termoestables. [19:35] La mayoría de las polimerasas no pueden soportar las temperaturas de un programa normal de PCR. [19:35] Nuestras polimerasas, por ejemplo, actúan en un entorno a 37 ºC; a 95ºC se desharían. [19:35] Las que se usan actualmente para PCR provienen de bacterias que viven en fuentes termales. [19:35] Estas polimerasas teromestables pueden seguir funcionando incluso tras haber sido sometidas a temperaturas de 95 ºC durante una hora. [19:36] Pero no todo ha de ser sobre hojuelas. Hablaré ahora de los factores críticos y las limitaciones de la PCR :( [19:36] Hay muchos factores muy críticos en una PCR. Nombraré sólo 3: [19:36] 1) La vida media de la polimerasa: los programas suelen ser de 30 ciclos porque ese es el tiempo máximo que las polimerasas aguantan las temperaturas de desnaturalización sin perder actividad. [19:36] 2) La longitud y secuencia del cebador: esto es crítico para elegir la adecuada temperatura a la que llevar a cabo la unión ADN-cebador. Es un tema peliagudo pero no quiero extenderme. [19:36] 3) La secuencia del ADN original: secuencias muy ricas en apareamientos G-C son muy difíciles de amplificar por PCR. Esto puede condicionar el uso de esta técnica para el estudio de algunos genomas. [19:36] En cuanto a las limitaciones de la PCR son cada vez menos, pero existen. [19:36] Una (y quizá la más importante) ya la mencionaron en la charla de ayer. [19:37] Se trata del peligro de contaminación. [19:37] Si en el tubo de ensayo original se introduce una pequeña cantidad de ADN extraño, por ínfima que sea... [19:37] ... el gran poder de replicación de la polimerasa hará aumentar también exponencialmente esa contaminación. [19:37] Hay maneras de minimizar o soslayar ese problema, por supuesto. [19:37] Pero, sobre todo para estudios con validez jurídica o de diagnóstico, hay que ir con muchísimo cuidado. [19:37] Otro problema es que la PCR no funciona bien sobre moléculas demasiado largas. [19:37] Más allá de pocos miles de "letras" la reacción no funciona bien (no recuerdo exactamente el tope máximo, lo siento). [19:37] De todas formas, prácticamente cada semana salen nuevas polimerasas más procesivas (con capacidad de generar cadenas más largas). [19:38] Estos dos problemas no lo son tanto en Biología Molecular, donde se dispone de muchas estregias para evitarlos. [19:38] En otro campos como la medicina forense, la PCR se ha introducido con fuerza... [19:38] ...pero los peligros de contaminación la convierten en una técnica a usar con mucho tacto (que se lo pregunten a la acusación del caso OJ Simpson, por ejemplo) [19:38] Sin embargo, en otros campos delicados como el diagnóstico clínico, la PCR se usa cada vez más y con más fiabilidad, sobre todo como técnica preparativa para la secuenciación. [19:38] Recapitulemos. [19:38] El principio de la PCR, aparentemente tan sencillo, ha supuesto una auténtica revolución en muchísimos campos [19:38] El por qué de la importancia que tiene la PCR es fácil de entender: gracias a esta técnica podemos aumentar en escala exponencial la cantidad de ADN que teníamos originalmente. [19:39] En teoría, sólo con que dispusiéramos de 1 molécula de ADN podríamos aumentar el número de copias de esa molécula hasta el orden de microgramos. [19:39] Un microgramo en biología molecular es mucho. [19:39] Con pocas docenas de microgramos tendríamos ADN suficiente para efectuar muchísimos tipos de estudios: [19:39] Un diagnóstico clínico, un estudio filogenético, una identificación del organismo del que proviene ese ADN... En todos estos casos podríamos obtener las cantidades necesarias por PCR. [19:39] Incluso teniendo en cuenta el salto (a veces grande) que suele haber entre la teoría y la práctica... [19:39] ...la utilización de la PCR ha abierto camino a técnicas y estrategias de investigación que hace 10 años (o menos) no hubieran parecido posibles. [19:39] Además, las técnicas, aparatos y reactivos mejoran día a día. [19:39] El tema es, por supuesto, muchísimo más extenso y complejo. [19:40] A este canal vienen expertos infinitamente mejor preparados que yo para explicar algunos de los aspectos más fascinantes de la PCR, pero... [19:40] ...no quiero abusar de vuestra paciencia :) [19:40] Si tenéis alguna duda (glabs) o pregunta (ejem), bueno, haré lo que pueda, pero los que sabéis del tema no os cortéis, echadme una mano, por favor. [19:40] Muchísimas gracias por vuestra atención. [19:40] FIN [19:40] yo tengo una pregunta > 4plas 5plas 6plas 7plas 8plas 9plas 10plas 11plas 12plas 13plas > 4plas 5plas 6plas 7plas 8plas 9plas 10plas 11plas 12plas 13plas > 4plas 5plas 6plas 7plas 8plas 9plas 10plas 11plas 12plas 13plas > 4plas 5plas 6plas 7plas 8plas 9plas 10plas 11plas 12plas 13plas > 4plas 5plas 6plas 7plas 8plas 9plas 10plas 11plas 12plas 13plas > 4plas 5plas 6plas 7plas 8plas 9plas 10plas 11plas 12plas 13plas [19:40] Bravoooo [19:40] Bravoooo [19:40] Bravoooo [19:40] Bravoooo > Por favor Tulkas.... pregunta [19:41] Magistral [19:41] 3,0Æ4,0@0,0-3,0Æ13,0@0,0-3,0Æ4,0@0,0-3,0Æ13,0@0,0 Torres_ 3,0Æ13,0@0,0-3,0Æ4,0@0,0-3,0Æ13,0@0,0-3,0Æ4,0@ [19:41] 0,0..3,0Æ13,0@0,0-3,0Æ4,0@0,0-3,0Æ13,0@0,0-3,0Æ4,0@12,0 Torres_ 3,0Æ4,0@0,0-3,0Æ13,0@0,0-3,0Æ4,0@0,0-3,0Æ13,0@ [19:41] 0,0....3,0Æ4,0@0,0-3,0Æ13,0@0,0-3,0Æ4,0@0,0-3,0Æ13,0@0,0 Torres_ 3,0Æ13,0@0,0-3,0Æ4,0@0,0-3,0Æ13,0@0,0-3,0Æ4,0 [19:41] puedo? [19:41] bravo!! > si por favor [19:41] Claro Tulkas :) [19:41] hay que ver esta shiquiya las cosas que sabe...!! [19:41] Jejejeje [19:41] pues, es que no he entendido bien el papel de los cebadores en todo esto [19:41] * Torres_ (antes morwen) se sonroja > a ver.. las preguntas se hacen indistintamente.... contestara bien A. Torres, bien A.M Alganza.... [19:42] Tulkas, los cebadores sirven para que la polimerasa puede iniciar la reacción [19:42] La polimerasa necesita DNA de doble cadena para actuar [19:42] Pero en ese momento el DNA está en simple cadena [19:42] Así que es necesario tener un pequeño trocito de doble cadena para que se una la polimerasa [19:42] FIN [19:42] aaahhhhh por eso no pueden estar a 90 grados [19:42] Exacto [19:42] porque tanbien se desdoblarian [19:43] pero si haces 30 ciclos, por ejemplo [19:43] ¡Muy bien! La unión ha de hacerse a temperaturas más bjas [19:43] en cada ciclo tienes que echar cebadores nuevos? [19:43] porque en cada ciclo alcanzas de nuevo los 90 grados [19:43] Tulkas, no: se suelen poner cebadores en exceso [19:44] Así que no importa que los cebadores se vayan incorporando a las nuevas cadenas, siempre tienes "stock" [19:44] entonces en cada ciclo desdoblas los cebadores, no? [19:44] Tulkas, los cebadores que se utrilizan en la PCR son de simple cadena, no de doble [19:44] De manera que nunca se unen a sí mismos [19:44] ahora si que me he liado [19:44] Sólo al DNA molde [19:45] alto ahi [19:45] los cebadores son el complementario de la cadena original? [19:45] Sí, pero mucho más cortos [19:45] Sólo se unen a un extremo de la cadena [19:45] entonces los tienes que fabricar sabiendo cual es el adn original [19:45] Sí, aunque hay maneras de evitar eso [19:45] o por lo menos cual es el extremo [19:46] No quería comentarlo porque quedaría demasiado largo, pero... [19:46] Ya que ha surgido... [19:46] Tulkas: las muestras de ADN, en muchos casos, están clonadas en vectores (moléclas de ADN que puedne incorporar ADN extraño y replicarse dentro de bacterias)... [19:46] ... Estos vectores tienen secuencia conocida [19:47] Si sabes en qué punto de la secuencia del vector se inserta el ADN extraño... [19:47] Puedes diseñar un cebador que cubra esa zona limítrofe [19:47] ok, ahora si [19:47] Y a partir de ahí empezar la amplificación de tu muestra [19:47] ¿Me he explicado? [19:47] si, ahora lo entiendo [19:47] gracias [19:47] * Claxoline felicita a Torres_ por su didactica enseñanza > Muchas gracias Tulkas..... ¿quien se anima con la siguiente pregunta o comentario? [19:47] Uf, qué alivio :) [19:47] Gracias Claxoline [19:47] ¿la polimerasa que se usa sigue siendo la de Thermus Aquaticus(Taq),o hay otras nuevas de otros organismos con mayor efectividad? [19:48] :)) [19:48] chesco, la más usada sigue siendo la Taq, pero han surgido otras de otras bacterias, como la Pwo [19:48] De todas maneras el último grito es modificar la Taq [19:49] Últimamente han salido taqs modificadas mucho más efectivas, con solo cambiar un aminoácido de la secuencia [19:49] Esto aumenta el poder de replicación de la Taq original hasta 10 veces más [19:49] FIN > Muchas gracias chesco..... ¿siguiente pregunta o comentario? [19:50] ¿que longitud es recomendable para un cebador? [19:50] chesco, depende del tipo de PCR que uses, entre 15 y 30 nucleótidos. AMA podrá decirte las longitudes que usa en su trabajo. [19:50] Yo trabajo con cebadores de 18 nt [19:51] Nosotros aquí solemos usar entre 18 y 22 bases [19:51] Sufienciente para que la cadena complementaria... [19:51] ..y, por tanto, la región a la que va a "unirse" sea única en la muestra que tienes [19:51] ¿mas largos no son fiables? [19:52] Pero no puede ser demasiado latrga... [19:52] ....o se corre el peligro de que haya homología entre ambos cebadores (los de ambos extremos del fragmento de ADN a replicar) [19:52] Y se unan entre ellos (ambos primers) quedando inactivos e impidiendo la reacción de la Polimerasa [19:52] FIN > Muchas gracias chesco..... ¿siguiente pregunta o comentario? [19:53] yo quiero > adelante tulkas [19:53] en los organismos vivos la temperatura de replicacion del adn es mucho mas baja [19:53] las temperaturas altas dan mas rendimiento? [19:54] o es que en los seres vivos hay otros factores que ayudan [19:54] donde es mayor el rendimiento? en los seres vivos o en el laboratorio? [19:54] Exactamente, Tulkas, in vitro no puedes copiar la manera en que el ADN se replica in vivo [19:54] En al organismo actúa una maquinaria enormemente compleja de enzimas [19:54] El rendimiento depende [19:55] En el laboratorio quieres obtener DNA a punta pala sin más [19:55] en el organismo lo que quieres es obtener DNA sin errores [19:55] Por eso la tasa es mucho menor [19:55] Pero la fiabilidad mucho mayor [19:56] que bien se explica esta chica [19:56] FIN [19:56] :)) [19:56] Quisiera añadir algo.... [19:56] una ultima pregunta, puedo? [19:56] Bravo por Torres!!! :-)) [19:56] Gracias majo, muacs [19:56] * Tulkas espera a ama [19:56] ... en principio podrías replicar el ADN a temperaturas más bajas... con las encimas adecuadas [19:56] En el laboratorio incrementas la temperatura hasta temperaturas tan elevadas... para hacer el proceso más rápido... [19:57] ....y como ha dicho Adela... incrementar la cantidad de copias que realizas [19:57] No sé si esto ayuda a que te aclares un poco más la idea [19:57] FIN [19:57] si, si que ayuda > Tulkas... tu y cada uno de los aqui presentes podeis hacer todas y cada una de las preguntas deseadas.... mientras aguanten nuestros maestros!! [19:57] yo quisiera hacer un pequeño comentario.... [19:57] mi ultima pregunta es > a ver Tulkas.. luego va Mcalbi [19:58] cual es la utilidad practica en la vida misma del mundo mundial? > jejejejejejejejejjejejeje [19:58] o sea en la vida cotidiana [19:58] jajajajaajaja [19:58] ¡Jajajajajajajajajajaja! [19:58] para que se usa la tecnica? tiene fines practicos? [19:58] Malvado, lo veía venir > tulkas... 10 minutos de rodillas de cara a la pared!! [19:59] A ver... hacemos un concurso tipo Un, Dos, Tres???? [19:59] * Tulkas se va con las orejas gachas [19:59] Jejejeje, no, AMA, que floodeamos [19:59] Tulkas, se usa (poquito) en criminología forense > jajajajajajajaja.... eso es para televidentes españoles... aqui hay gente de los dos lados del charco [19:59] También en clínica, para diagnósticos [20:00] Investigación básica de genomas [20:00] para hacer pruebas de paternidad por ejemplo [20:00] paleontología [20:00] Selección sexual (gracias Pilar) [20:00] Evolución [20:00] seleccion sexual? de quien? [20:00] de bacterias? [20:00] AMA... díselo tú ;) > ese tema es la tesis del Prof Alganza [20:01] ah! de gusanos! [20:01] Desarrollo de nuevos fármacos [20:01] Se trata de análisis de paternidad [20:01] Como ha dicho chesco [20:01] Estudios poblacionales [20:01] Paleobiología [20:02] Terapia génica [20:02] ¿Sigo? [20:02] no no ya vale [20:02] :) > ese tema de Seleccion sexual es la tesis del Prof Alganza, en el Max-Plank-Institut aleman. Esperemos que en una ocasion especialmente preparada nos ilustre con mas detalle. [20:02] yo ya lo sabia...era para que lo supieran los demas [20:02] * Tulkas disimula su ignarancia como puede [20:02] Buenos reflejos Tulkitaz > Muchas gracias Tulkas.. tu turno Mcalbi [20:03] En realidad la PCR es más una técnica preparativa, una herramienta que aumenta la eficiencia de la investigación en muchos campos. [20:03] Perdón [20:03] bien, solo queria hacer un pequeño comentario...no sin antes felicitar a Morwen y a AMA por su magnífica exposición... [20:04] quizá os parecerá un comentario fuera de lugar pero.. > no te preocupes por eso Mcalbi [20:04] leyendo la exposición y pecando de susceptibilidad hacia mi mundo que son los materiales.. [20:05] al leer me ha recordado mucho el proceso que se utiliza habitualmente para la fabricación de los materiales plásticos, salvando las distancias claro, me explico... [20:06] al fabricar un plástico se suele utilizar dos componentes, que junto con un polimerizante.. [20:06] y con un catalizador o enzima... [20:06] a cierta temperatura.. [20:06] forma unas cadenas molecurares realmente apabullantes.. [20:06] del orden de los millones que mencionaba antes morwen.... [20:07] es curiosa la coincidencia no???....no lo tomeis muy en serio....pero no he podido evitar recordarlo cuando leia el proceso descrito... [20:07] simplemente eso.... [20:07] fin.. [20:07] bueno...el ADN es un polimero, en realidad [20:08] no es extraño que los procesos de formacion sean similares [20:08] es como en la evolucion...animales que realizan el mismo papel en el ecosistema se parecen morfologicamente [20:09] Exácto, Tulkas, y quizás pase algo parecido en la formación de cristales, no? [20:09] Hay muchos paralelismos con lo que dice McAlbi, es verdad, pero el DNA es un polímero heterogéneo: tiene 4 tipos de subunidades, y lo que importa es el orden en el que están dispuestas. [20:10] claro, es parecido pero no igual [20:10] * Torres_ recuerda que una de las más audaces teorías acerca del origen de la vida está basada casi en lo que ha dicho McAlbi! ¡Qué cosas! :) [20:10] en ningún momento he querido equiparar la importancia del ADN al la de un plástico cualquiera....no me malinterpreteis... [20:10] no, los plasticos son mas importantes [20:10] Jejejejejeje, Tulkas tiene razón [20:11] cualquier ser vivo replica el adn, pero a ver cual hace plastico [20:11] Y los cristales más aún, Tulkas, o no? [20:11] no queria hablar de lo mio, ama, pero ya que me opinchas [20:11] si!!!!!! [20:11] además los plásticos tienen algo mas curioso aún.. [20:11] jajajajajaja [20:12] :) [20:12] Los hay que hacen plástico ,Tulkas [20:12] También hay bacterias que hacen (y comen) plástico :) [20:13] los dos componentes iniciales , órganicos ambos, por separado son totalmente inútiles!!! [20:13] en realidad el proceso de formacion de polimeros es siempre muy parecido [20:13] ved la formacion de polisacaridos, por ejemplo [20:13] ¡Anda! [20:13] *** Torres_ is now known as Morwen [20:14] parecido en cuanto a concepto general de proceso, Morwen, no en los detalles [20:14] Por supuesto, Tulkas [20:15] * Tulkas no puede mas que rendir una cumplida reverencia ante tan docta biologa [20:16] * Morwen agradece la reverencia y responde con otra algo más prudente (el lumbago...) ;) > Muchas gracias Tulkas y Mcalbi..... ¿siguiente pregunta o comentario? [20:17] Aunque ya habéis comentado algo, qué podéis decir de aplicaciones clínicas diagnósticas o terap. ya rutinarias y/o de las de futuro que os parezcan más trascendentes? > yo tengo una cuestion...... estas pruebas se utilizan, entre otars cosas, para investigar paternidad.... > pero ¿como se averigua eso..? > si cada individuo tiene un gen porcedente de cada progenitor..... > y esl DNA esta en gran medida pendiente de leer... [20:18] Bueno, ambas preguntas se pueden contestar más o menos simultanemaente... [20:18] Pilar y stan: la PCR no sirve directamente para ninguna de esas cosas... Es sólo un método de obtener las cantidades necesarias de ADN [20:18] ... la PCR es una técnica que te permite hacer muchas copias de un fragmento de ADN que te interese... [20:19] Pilar y stan... como ha dicho AMA, la PCR sirve básicamente para aumentar la cantidad de muestra de ADN [20:20] Pero hay maneras más sutiles de utilizarla [20:21] En vuestras preguntas, la respuesta es la misma: la PCR te permite obtener más muestra y ponérselo fácil al paciente, por ejemplo sacándole sólo 10 ml de sangre en vez de 3 litros y medio :) [20:21] Las pruebas de paternidad se llevan a cabo usando marcadores como RFLPs o microsatélites [20:22] No por PCR [20:22] Los usos más "sutiles" de la PCR que he mencionado antes pueden parecer algo esotéricos, y de momento se usan poco, de manera que no entraré en ello. FIN > Muchas gracias.... ¿mas cuestiones?? > ¡¡aprovechense que tenemos a los maestros bien dispuestos!! [20:23] * Tulkas solo se cuestiona como no le dan a esta chica el premio Nóbel [20:24] * Morwen se toma un bocata plomo para bajarse el ego, que lo tiene por las nubes... :) > jajajajaajajajaj [20:24] * McAlbi se despide no sin antes preguntar a morwen: "bueno, a ver, qué pasa aquí??"...:)) [20:25] Ta otra McAlbi, ¡jajajajajajajaja, muy buenooo! XD > pues en caso de que no haya mas preguntas..... solo nos queda felicitar a nuestros maestros de hoy... y dedicarles un aplauso!! [20:25] chao, mac [20:25] chao a todos!! [20:25] * Zerlina no se ha enterao de na pero tiene las manos despellejás de tanto aplaudir a morwen [20:25] plas plas plas plas plas plas plas plas plas [20:25] plas plas plas plas plas plas plas plas plas > 4plas 5plas 6plas 7plas 8plas 9plas 10plas 11plas 12plas 13plas > 4plas 5plas 6plas 7plas 8plas 9plas 10plas 11plas 12plas 13plas > 4plas 5plas 6plas 7plas 8plas 9plas 10plas 11plas 12plas 13plas [20:25] * Tulkas aplaude a rabiar > 4plas 5plas 6plas 7plas 8plas 9plas 10plas 11plas 12plas 13plas > 4plas 5plas 6plas 7plas 8plas 9plas 10plas 11plas 12plas 13plas > 4plas 5plas 6plas 7plas 8plas 9plas 10plas 11plas 12plas 13plas > 4plas 5plas 6plas 7plas 8plas 9plas 10plas 11plas 12plas 13plas [20:25] tecnica de PCR con hibridización para tipificacion de cepas virales? [20:25] plas plas plas plas [20:25] plas plas plas plas [20:25] plas plas plas plas [20:26] 2,2 b1 plas plas plas plas plas plas plas plas plas plas! [20:26] 0,2 b1 plas plas plas plas plas plas plas plas plas plas 1,1! [20:26] 2,2 b1 plas plas plas plas plas plas plas plas plas plas 1,1! [20:26] 0,0 1,1 b1 plas plas plas plas plas plas plas plas plas plas! [20:26] 2,2 b1 plas plas plas plas plas plas plas plas plas plas! [20:26] 0,2 b1 plas plas plas plas plas plas plas plas plas plas 1,1!