ABERRACIONES CROMOSÓMICAS EN EL CARCINOMA FARINGO-LARÍNGEO (CFL) MEDIANTE LA TÉCNICA DE HIBRIDACIÓN GENÓMICA COMPARATIVA.
MA Guervós1, MAJA
Hermsen2, C Alvarez-Marcos3, GA Meijer2, PJ
van Diest2, JPA Baak2, A Salas1, A Sampedro1.
Servicio de Citometría, Universidad de Oviedo, Asturias, España1.
Department of Quantitative Pathology, Free
University Hospital, Amsterdam, Holanda2.
Departamento de Otorrinolaringología, Hospital Valle del Nalón, Asturias, España3.
OBJETIVOS MATERIAL Y MÉTODOS RESULTADOS CONCLUSIONES BIBLIOGRAFÍA
En los últimos años han sido muchos los avances en el
campo clínico-patológico y citométrico aplicados a los carcinomas de faringe y
laringe (CFL). Sin embargo, los conocimientos sobre la progresión tumoral aún
son escasos. Los estudios genéticos podrían ayudar a conocer el comportamiento
tumoral así como dar una visión de las alteraciones genéticas específicas
involucradas en la génesis de estos tumores. Nuestro objetivo ha sido estudiar
las alteraciones genéticas a nivel cromosómico por medio de la CGH e intentar
relacionar estos resultados con las características clínicas y citométricas.
Las muestras tumorales han sido obtenidas de áreas no
necróticas pertenecientes a 22 tumores de laringe y 20 tumores de faringe (42
muestras) operados en el Hospital Valle del Nalón, Asturias, España, congelados
inmediatamente y almacenados en nitrógeno líquido. Los datos clínicos nos
informan de un gran número de muestras en estadio IV (25 muestras) y con un
grado de diferenciación moderado (23 muestras). No hay metástasis a distancia.
Se ha extraído el ADN de las 42 muestras de material
congelado, las cuales han sido analizadas utilizando la técnica de CGH. Esta
técnica ha sido realizara según se describe en WEISS et al. Brevemente, la
técnica se basa en un marcaje de ADN tumoral y de ADN normal o de referencia
con un fluorocromo verde (FITC) y uno rojo (TRITC), respectivamente, utilizando
técnicas estándares de “nick translation”, e hibridando estos ADNs sobre una
preparación de metafases normales durante 3 días a 40 grados en cámara húmeda.
El ADN tumoral (señal fluorescente verde) y el ADN normal (señal fluorescente
roja) compiten en hibridarse sobre las metafases normales Figura1. La señal fluorescente emitida
por la muestra es analizada como la proporción verde/rojo que es calculada
utilizando programas informáticos de análisis de imágenes (Cytovision 3.5 of
Applied Imagen system). La proporción verde/rojo indica las zonas del cromosoma
en las que existe una ganancia (proporción verde/rojo>1) o una pérdida
(proporción verde/rojo<1) de material genómico Figura2.
El resultado final de la CGH es el perfil para cada cromosoma de la
media de proporciones verde/rojo
medidas en 10-15 metafases bien seleccionadas. Para estas muestras se
dispone de datos citométricos (índice de ADN y fase S), así como datos de pTNM
y localización tumoral.
Los análisis estadísticos han sido realizados aplicando
test de t de Student y chi-cuadrado utilizando el programa informático para
análisis estadístico SPSS.
Se han encontrado un gran numero de alteraciones
cromosómicas con una media de ganancias y perdidas por caso de 11,2 y 6,8,
respectivamente. Las ganancias cromosómicas más frecuentes han sido localizadas
en 3q (35 casos). Otras ganancias frecuentemente encontradas han sido
localizadas en 8q (28 casos), 7q (24 casos), 11q13 (22 casos) y 5p y 17q (21
casos), 1q y 18p (18 casos), 7p y 12p (17 casos), 12q (15 casos), 9q y 22p (14
casos), 2q, 14q y 20p (12 casos) y 6q, 16q y 20p (11 casos). La presencia de
áreas con un alto grado de amplificación fue encontrada en 63 casos, siendo el
fragmento 3q24-ter (15 casos) el más frecuente. Otros fragmentos con alto grado
de amplificación fueron localizados en: 11q13 (7 casos), 18p (5 casos), 18q11.2
(4 casos) y 8q23-24 y 11q14-22 (3 casos).
La pérdida cromosómica más frecuente fue localizada en 3p (31 casos).
Otras zonas con perdida de material tumoral se encontraron en: 11qter (18
casos), 4p, 5q y 18q (16 casos). Figura3
En algunos
cromosomas se ha encontrado simultáneamente ganancia de material genético en un
brazo del cromosoma y pérdida en el otro; esto es indicativo de formación de
isocromosomas, factor muy típico en los carcinomas de tipo escamoso como son
los carcinomas de laringe y faringe. Este fenómeno ha sido observado en el
cromosoma 3 (30 casos con perdida de 3p/ganancia de 3q), cromosoma 5 (11 casos
con ganancia de 5p/pérdida de 5q), cromosoma
8 (11 casos con pérdida de 8p/ganancia de 8q), cromosoma 9 (6 casos con
pérdida de 9p/ganancia de 9q), cromosoma 11 (7 casos con pérdida de
11p/ganancia de 11q13/pérdidad de
11qter), cromosoma 17 (7 casos con pérdida de 17p/ganancia de 17q), cromosoma
18 (11 casos con ganancia de 18p/pérdidad de 18q). Además, se ha observado que
un 36 % de todas las alteraciones cromosómicas detectadas afectan a todo el
brazo cromosómico: 1p (6 casos), 3p (19 casos), 3q (22 casos), 4p (7 casos), 5p
(16 casos), 5q (8 casos), 8p (6 casos), 8q (17 casos), 9p (7 casos), 9q (6
casos), 11p (5 casos), 17p (7 casos), 17q (10 casos), 18p (11 casos), 18q (9
casos); y en varios casos se ha observado que la presencia simultánea de
pérdida de material genético en un brazo y ganancia en el otro brazo del
cromosoma afectaba al brazo completo
del cromosoma: cromosoma 3 (14 casos), cromosoma 5 (8 casos), cromosoma 8 (5
casos), cromosoma 9 (3 casos), cromosoma 17 (5 casos), cromosoma 18 (7 casos).
No se ha
encontrado diferencias significativas en la media de alteraciones cromosómicas
por caso o en la localización de dichas alteraciones cromosómicas en relación con
el índice de ADN, localización tumoral o estadio pTNM. La pérdida de 3p está
correlacionada significativamente con la presencia de amplificaciones de alto
grado (p= 0,017), así como con un gran número de alteraciones cromosómicas
(p=0,000), especialmente con perdidas de material genético. Todos los casos de
estadio temprano (I y II, 8 casos) muestran una pérdida en 3p.
Como conclusión se puede decir que existe un alto número
de alteraciones cromosómicas por caso, siendo el cromosoma 3 (ganancia de 3q y
perdida de 3p) el evento más frecuente. La correlación entre la pérdida de 3p y
la presencia de un alto número de otras alteraciones cromosómicas, así como su
presencia en los casos de estadios más tempranos pone de manifiesto el importante
papel del brazo 3p como posible desencadenante de la progresión tumoral. Se
están estudiando mas casos de estadio temprano para poder conocer mejor la
correlación de estas alteraciones cromosómicas con los datos clínicos de
seguimiento y poder definir un patrón más aproximado de aberraciones
cromosómicas en los carcinomas de laringe y faringe.
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