EXPRESION DE LA PROTEINA PAI-2 (INHIBIDOR DEL ACTIVADOR DEL PLASMINÓGENO TIPO 2) EN LOS DERRAMES PLEURALES MALIGNOS.

L.Gómez-Izquierdo,F.Rodríguez-Panadero*,C.Troncoso,J.Martín*,F.Borderas

Departamento de Anatomía Patológica y *Unidad Médico-Quirúrgica de Enfermedades Respiratorias. Hospitales Universitarios "Virgen del Rocío". Sevilla. España

Palabras clave: Coagulación, fibrinolisis, derrame pleural maligno.

Nuestro trabajo en los últimos años se ha centrado en buscar el origen de la hiperfibrinolisis pleural que ocurre en los casos de pleurodesis fallida, principalmente en aquellos cuya naturaleza es neoplásica.(1)

Así, para la consecución de una pleurodesis eficaz, es necesario que el balance coagulación/fibrinolisis endopleural se decante hacia el lado procoagulante. De este modo se obtiene una malla de fibrina sobre la cual se depositan los fibroblastos que serán el origen de las adherencias fibrosas entre ambas hojas pleurales (1).

Con objeto de investigar el origen de la hiperfibrinolisis endopleural asociada al fallo en la pleurodesis (1), estudiamos los mediadores de la fibrinolisis; sus activadores, tipo uroquinasa (uPA) y tisular (tPA), su receptor (uPAR) y sus inhibidores tipo 1 y 2 (PAI-1 y PAI-2) mediante técnicas de inmunohistoquímica tanto en el líquido como en el tejido pleural neoplásico. Los resultados más significativos obtenidos fueron:

• La expresión de activadores de la fibrinolisis tipo uPA y tPA así como del inhibidor PAI-1 por parte del tejido pleural no tumoral (mesotelio y fibroblastos submesoteliales y peritumorales) juegan un papel importante en el resultado de la pleurodesis (2).
• La modulación de la fibrinolisis por parte de la pleura no tumoral es un fenómeno extenso y no sólo limitado al entorno de las lesiones tumorales (3).

• La sobreexpresión de activadores de la fibrinolisis (uPA activador del plasminógeno tipo uroquinasa, uPAR receptor) y de sus inhibidores (PAI-1 inhibidor del activador del plasminógeno) por parte de las células tumorales, se ha descrito como marcador de mal pronóstico en cuanto que indicarían alta incidencia de recidivas, menor tiempo libre de enfermedad y muerte precoz. En el caso de los tumores pleurales no hemos obtenido datos que corroboren el valor de la expresión de PAI-2 por parte de las células neoplásicas como marcador de buen pronóstico (4).
• En cambio la expresión de PAI-2 por parte del tejido pleural no tumoral sí parece estar relacionada con el éxito o fracaso de la pleurodesis, y con la supervivencia de los pacientes (4 ).

Todos estos resultados nos llevan a la siguiente pregunta: ¿ la expresión de mediadores de la fibrinolisis tanto en las células neoplásicas como en el componente no tumoral del tejido pleural que encontramos, se debe a la síntesis proteica por parte de las células implicadas, o bien es un falso positivo debido a la captación de los componentes proteicos ?

PACIENTES, MATERIAL Y MÉTODOS

Hemos estudiado 10 pacientes con derrame pleural maligno, a los que se realizó toracocentesis evacuadora, toma de biopsia pleural mediante toracoscopia y pleurodesis con talco

Las biopsias pleurales obtenidas por toracoscopia fueron fijadas en formol e incluidas en parafina según protocolo habitual. En ellas se estudió la expresión de PAI-2 mediante técnicas de hibridación "in situ" e inmunohistoquímica . Los resultados de ambas técnicas fueron valorados y cuantificados por dos patólogos de forma independiente y comparados entre si.

Métodos

1. Inmunohistoquímica:

Estudio inmunohistoquímico con anticuerpo monoclonal frente a PAI-2 (American Diagnostica inc. ) a una concentración de 10 mgr/ml siguiendo el método avidina-biotina-estreptavidina .

• Cuantificación:

2. Hibridación "in situ" (IHS).

Estudio con sonda marcada con biotina mPAI-2 (Oncogene Research Product), a una concentración de 0.015mg/ml y amplificación de la señal mediante sistema Dako Gen Point (sistema de amplificación catalítica de la reacción) según protocolo.

• Cuantificación:

RESULTADOS

CONCLUSIONES

• El PAI-2 se expresa tanto en las células tumorales como en la pleura no tumoral y el componente inflamatorio monocitario.
• Su expresión es independiente del tipo histológico tumoral a excepción de los linfomas que no expresan los componentes del sistema fibrinolítico. (fig.1 y 2)
• La inmunotinción es fundamentalmente citoplasmática , en algunos casos nuclear y de membrana sólo en las células inflamatorias.
• La expresión de PAI-2 en el componente pleural no tumoral se centra principalmente en el mesotelio, aunque también está presente en los fibroblastos submesoteliales y peritumorales.
• El mRNA PAI-2 se expresa principalmente en las células tumorales y en menor proporción en el mesotelio y los fibroblastos submesoteliales. (fig.3 y 4)
• Si comparamos los resultados obtenidos mediante las técnicas inmunohistoquímicas y moleculares en el estudio de la expresión de la proteina PAI-2 , observamos que existe buena correlación entre ambos.
• A pesar de los pocos casos estudiados se observa que la expresión de PAI-2 por IHS es más amplia en las células tumorales y menor en el mesotelio y fibroblastos, a diferencia de lo que observamos por inmunohistoquímica , donde el mesotelio expresa la proteina PAI-2 practicamente en la totalidad de las muestras.

BIBLIOGRAFÍA:

1. Rodríguez-Panadero F, Segado A, Martín-Juan J, Ayerbe R,Torres García I , Castillo J. "Failure of talc pleurodesis is associated with increased pleural fibrinolysis" Am J Respir Crit Care Med 1995;151 :785-790
2. Rodríguez-Panadero F, Gómez-Izquierdo L, Martín-Juan J, Borderas F, Sánchez F, Segura DI. "Balance between expresion of plasminogen activators and their inhibitor (PAI-1) in pleural tissue, is associated to outcome of talc pleurodesis". Am J Respir Crit Care Med 1997 ;155,4:A739
3. Rodríguez-Panadero F, Gómez-Izquierdo L, Martín-Juan J, Borderas F, Segura DI ."Expression of marker for fibrinolysis by non-tumoral pleural cells that are adjacent to tumor nest does not differ from the expression by the distant ones". Am J Respir Crit Care Med 1998; 157,3:A63
4. Rodríguez-Panadero F, Gómez-Izquierdo L, Martín-Juan J, Borderas F, Segura DI. "Expression of plasminogen activator inhibitor Type-2 by tumor cells or fibroblasts is inversely related to the outcome of talc pleurodesis in malignant pleural effusions". Am J Respir Crit Care Med 1999; 159,3:A384.
5. Bacus S, Flowers JL, Press M, Bacus J, McCarty KS.: "The evaluation of estrogen receptor in primary breast carcinoma by computer-assisted image analysis". Am J Clin Pathol 1988;90:233-239.

Test de autoevaluación:

¿Cuál de los siguientes mediadores de la fibrinolisis actua como inhibidor de la misma?

1. uPA
2. uPAR
3. tPA
4. PAI-1
5. estreptoquinasa