[18:08] *** MIzquierd (mjcoma@inv-pc16.hgy.es) has joined #curso
[18:08] <Samwise> BUenas tardes
[18:08] <MIzquierd> hola buenas tardes 
[18:08] <MIzquierd> como están ustedes ?
[18:08] <manuel> bieeeeeen
[18:08] <MIzquierd> han estudiado ??
[18:08] <Samwise> poco
[18:09] <manuel> muy poco
[18:09] <Menhir> si, ¿por qué?
> como veran hay dos temas
> uno de ellos, lo ha mandado la Dra. Carmen Garcia: esta en word....
[18:10] <Menhir> inflamación e intoxicaciones
> se lo bajan y estudian por favor: es muy interesante....
[18:10] <Samwise> cual de ellos?
> el otro tema, sin imagenes, es el que vamos a dar ahora... 
[18:11] <Samwise> ok, ya baja
[18:11] <MIzquierd> cuando quietan empezamos
[18:12] *** nacho (jisg@193.153.236.185) has joined #curso
> hola nacho
[18:12] <nacho> hola
> estabamos esperandote.....
[18:12] <nacho> gracias... perdón por la espera
> podemos empezar ya ??
[18:13] <federico> si
[18:13] <Menhir> si
[18:13] *** Menhir is now known as mfuentes
[18:14] <MIzquierd> APOPTOSIS EN LINFOCITOS T.
[18:14] <MIzquierd> Introducción y antecedentes:
[18:14] <MIzquierd> La apoptosis o muerte celular programada es un mecanismo 
   muy conservado a
[18:14] <MIzquierd> lo largo de la escala evolutiva que participa de manera 
   esencial en el
[18:14] <MIzquierd> desarrollo y en el mantenimiento de la homeostasis del 
   sistema inmune (1),
[18:14] <MIzquierd> entre otros.
[18:15] <MIzquierd> La activación del complejo CD3-receptor para el antígeno 
   (CD3/TCR) origina
[18:15] <MIzquierd> la transición de los linfocitos T desde la fase G0 a la 
   G1 del ciclo
[18:15] <MIzquierd> celular, producción de Interleukina 2(IL-2) y expresión 
   del receptor para
[18:15] <MIzquierd> Interleukina 2 (IL-2R), proceso que se denomina 
   activación celular. 
[18:15] <MIzquierd> La progresión de las linfocitos T desde la fase G1 a la 
   de síntesis de DNA en
[18:15] <MIzquierd> el ciclo celular está regulada posteriormente por la 
   interacción entre IL-2
[18:15] <MIzquierd> y el IL-2R. Así pues, aunque el TCR condiciona la 
   especificidad clonal de
[18:16] <MIzquierd> la respuesta en activación del linfocito T al antígeno, 
   la IL-2 es el
[18:16] <MIzquierd> regulador clave de la proliferación de los linfocitos T 
   (2).
[18:16] <MIzquierd> En ciertas condiciones, la activación del linfocito T a 
   través del
[18:16] <MIzquierd> complejo TCR/CD3 puede inducir muerte celular programada 
   (apoptosis). 
[18:16] <MIzquierd> Esta modalidad de apoptosis se denomina muerte celular 
   inducida por activación (AICD) (3). 
[18:16] <MIzquierd> La eliminación de clones T autoreactivos a través de AICD 
   es
[18:16] <MIzquierd> uno de los mecanismos implicados en el mantenimiento de 
   la tolerancia hacia lo propio (4). 
[18:16] <MIzquierd> Ya que el TCR es el único receptor de superficie de
[18:17] <MIzquierd> linfocitos T que presenta una distribución clonal, son 
   las señales
[18:17] <MIzquierd> inducidas tras estimulación de este receptor  las que 
   condicionan la muerte
[18:17] <MIzquierd> o la supervivencia/activación de un clon determinado. 
   Existen en el sistema
[18:17] <MIzquierd> immune dos procesos fundamentales  que  se regulan 
   mediante AICD. 
[18:17] <MIzquierd> En el timo, los linfocitos que expresan TCRs que 
   reconocen antígenos propios con
[18:17] <MIzquierd> alta afinidad sufren apoptosis en respuesta  a señales de 
   las células
[18:17] <MIzquierd> vecinas (proceso que se denomina selección negativa 
   intratímica).
[18:18] <MIzquierd> La selección negativa en el timo requiere el 
   reconocimiento por el TCR de
[18:18] <MIzquierd> péptidos antigénicos asociados a moléculas del complejo 
   mayor de
[18:18] <MIzquierd> histocompatibilidad (MHC) en la superficie de las células 
   presentadoras de antígeno.  
[18:18] <MIzquierd> Por otro lado, la eliminación clonal actúa también en el 
   sistema
[18:18] <MIzquierd> immune periférico y afecta a linfocitos T maduros. 
[18:18] <MIzquierd> Este proceso actúa regulando la homeostasia immune 
   periférica ya que contribuye a la
[18:18] <MIzquierd> eliminación de clones reactivos y a la terminación de una 
   respuesta immune
[18:19] <MIzquierd> específica (4, 5). 
[18:19] <MIzquierd> Ambos procesos, activación y AICD, implican regulación
[18:19] *** Samwise has quit IRC (Ping timeout for Samwise[195.53.67.170])
[18:19] <MIzquierd> de la expresión génica, que requiere transcripción de 
   novo y traducción
[18:19] <MIzquierd> (fase de "programación"), seguida de una fase efectora de 
   "ejecución", que
[18:19] <MIzquierd> puede conducir bien a proliferación celular o hacia 
   apoptosis. El control
[18:19] <MIzquierd> de ambas respuestas es fundamental para el mantenimiento 
   de la homeostasis
[18:19] <MIzquierd> de la respuesta inmune. Sin embargo, los mecanismos 
   moleculares
[18:19] <MIzquierd> responsables del balance entre proliferación y apoptosis 
   son desconocidos,
[18:20] <MIzquierd> aunque tienen algunos efectores y segundos mensajeros 
   comunes (2, 6, 7, 8).
[18:20] <MIzquierd> El mecanismo principal propuesto para explicar el proceso 
   de AICD
[18:20] <MIzquierd> en el sistema immune periférico implica al sistema 
   Fas/FasL. 
[18:20] <MIzquierd> La estimulación a través del TCR de linfoblastos T y de 
   líneas T tumorales
[18:20] <MIzquierd> induce el mRNA de FasL ("fase de programación"), que se 
   une  a  su receptor
[18:20] <MIzquierd> Fas expresado en las mismas células e induce la muerte 
   autocrina mediante
[18:20] <MIzquierd> apoptosis en una segunda fase ("fase de ejecución") (9).
[18:21] <MIzquierd> Los resultados de estudios previos demuestran que, en 
   linfocitos T,
[18:21] <MIzquierd> la estimulación del receptor de antígeno (TCR)  produce 
   una estimulación
[18:21] <MIzquierd> rápida de p21ras , como se demuestra por su conversión 
   desde la forma
[18:21] -MJesus- Conoces a pask
[18:21] <MIzquierd> inactiva (unida a GDP) a la forma activa (unida a GTP) 
   (10, 11, 12).
[18:21] <MIzquierd> Resultados posteriores han demostrado que la cascada 
   Ras/Raf/ERK2 actua
[18:21] <MIzquierd> acoplando el TCR a la inducción (activación) de factores 
   de transcripción
[18:21] <MIzquierd> (c-fos) que forman parte del complejo NFATn. Este 
   complejo se uniría al
[18:21] <MIzquierd> factor NFATc (que se activa a través de la vía 
   calcio/calcineurina) para
[18:22] <MIzquierd> colaborar de forma sinérgica en la inducción del gen de 
   la IL-2 (13). 
[18:22] <MIzquierd> Por consiguiente, la cascada Ras/Raf/ERK2 desempeña un 
   papel esencial en la
[18:22] <MIzquierd> activación de linfocitos T (13, 14, 15, 16). De una 
   manera análoga, varios
[18:22] <MIzquierd> resultados indican que la vía de Ras/ERK2 contribuye 
   junto a la vía del
[18:22] <MIzquierd> calcio/calcineurina/NFAT a la regulación óptima del gen 
   de FasL (7, 17)
[18:22] <MIzquierd> durante la "fase de programación" de AICD.
[18:22] <MIzquierd> El sistema FasL/Fas también está implicado en la 
   apoptosis inducida
[18:23] <MIzquierd> por el tratamiento de distintas líneas tumorales con 
   drogas eficaces en la
[18:23] -MJesus- Conoces a pask_
[18:23] <MIzquierd> quimioterapia del cáncer. El tratamiento de líneas 
   tumorales leucémicas,
[18:23] <MIzquierd> hepatocarcinoma, hepatoblastoma, líneas celulares de 
   cáncer gástrico y de
[18:23] <MIzquierd> carcinoma de colon con drogas anticancerosas de muy 
   diverso mecanismo de
[18:23] <MIzquierd> acción (metrotexato, 5-fluorouracilo, ciclofosfamida, 
   cisplatino,
[18:23] <MIzquierd> doxorubicina, vincristina, 6-mercaptopurina, etoposido, 
   bleomicina,
[18:23] <MIzquierd> mitoxantrona, mitomicina) induce  regulación positiva de 
   los mensajeros de
[18:23] <MIzquierd> FasL y Fas, y la apoptosis mediada por la interacción de 
   ambos (18, 19,
[18:24] <MIzquierd> 20). Sin embargo, existen ejemplos de líneas celulares de 
   tumor de mama
[18:24] <MIzquierd> (línea MCF-7) donde se ha demostrado que, aunque las 
   drogas doxorubicina y
[18:24] <MIzquierd> metrotexato inducen regulación positiva de Fas, la 
   interacción Fas/FasL no
[18:24] <MIzquierd> contribuye a la inducción de apoptosis por estas drogas 
   (21).
[18:24] <MIzquierd> Los requerimientos en términos de señales y mediadores
[18:24] <MIzquierd> intracelulares entre las fases de programación y 
   ejecución de AICD son muy
[18:24] <MIzquierd> diferentes. Así, en la fase de programación de AICD se 
   requiere activación
[18:25] <MIzquierd> transcripcional que se inhibe por ciclosporina A(CSA)  y 
   síntesis de
[18:25] <MIzquierd> proteínas (FasL), elevaciones de calcio intracelular y 
   activación de
[18:25] <MIzquierd> factores de transcripción dependientes de calcio (8, 9). 
[18:25] <MIzquierd> Por el contrario, la fase de ejecución de apoptosis tras 
   la unión de FasL 
[18:25] <MIzquierd> a su receptor Fas no presenta estos requerimientos, 
[18:25] <MIzquierd> pero sí la activación de cisteín-proteasas de la familia 
   ICE (caspasas) (8, 22).
[18:25] <MIzquierd> La línea celular Jurkat JHM12 constituye un buen modelo 
   de estudio
[18:25] <MIzquierd> de señalización citoplasmática y nuclear en activación 
   celular y AICD (8,
[18:26] <MIzquierd> 23) y además expresan el receptor muscarínico  subtipo 1 
   (HM1R) (23).
[18:26] <MIzquierd> Este receptor heterólogo se acopla a través de proteínas 
   G a la activación de la
[18:26] <MIzquierd> PLCb celular. La unión del agonista (carbacol) al 
   receptor produce la
[18:26] <MIzquierd> activación selectiva de la ruta de la PLC-PKC, pero no de 
   la ruta de las
[18:26] <MIzquierd> PTKs (24). Dado que estas células expresan a su vez el 
   complejo TCR/CD3 es
[18:26] <MIzquierd> posible estudiar en las mismas células las consecuencias 
   que sobre la
[18:26] <MIzquierd> inducción de apoptosis tiene la activación de uno u otro 
   receptor.
[18:27] <MIzquierd> Nuestros datos previos indican que la estimulación 
   selectiva de la
[18:27] <MIzquierd> ruta PLC-PKC con carbacol es suficiente para inducir la  
   activación celular
[18:27] <MIzquierd> (expresión del mRNA de IL-2) (23) y expresión del mRNA de 
   FasL y la
[18:27] <MIzquierd> apoptosis (8). Estos datos nos han permitido una 
   disección preliminar de
[18:27] <MIzquierd> las vías implicadas en la regulación de la expresión del 
   FasL. Por otro
[18:27] <MIzquierd> lado hemos podido establecer que los incrementos de [Ca2+ 
   ] intracelular
[18:27] <MIzquierd> son necesarios para la inducción del mRNA de FasL y que 
   Ciclosporina A
[18:27] <MIzquierd> (CSA) inhibe la inducción del mismo vía estimulación del 
   TCR y HM1R (8). Ya
[18:28] <MIzquierd> que CSA es un inhibidor específico de la Calcineurina 
   (fosfoproteín
[18:28] <MIzquierd> fosfatasa dependiente de calcio y calmodulina) nuestros 
   resultados sugieren
[18:28] <MIzquierd> que la calcineurina es un factor implicado en la 
   regulación de las
[18:28] <MIzquierd> expresión del mRNA de FasL. Sin embargo, nuestros 
   resultados y los de otros
[18:28] <MIzquierd> grupos indican que la activación de la vía 
   calcio/calcineurina, si bien es
[18:28] <MIzquierd> necesaria, no es suficiente para la inducción del mRNA de 
   FasL (7, 8). 
[18:28] *** Samwise (Samsagaz@195.235.225.33) has joined #curso
[18:28] <MIzquierd> Así pues, aunque algunas de las vías de señalización en 
   activación celular y
[18:29] <MIzquierd> AICD son comunes (por ejemplo calcio/NFAT y Ras/ERK2), no 
   está claro si
[18:29] <MIzquierd> existe identidad parcial o total entre ellas.
[18:29] <MIzquierd> RESUMEN:
[18:29] <MIzquierd> La activación del linfocito T a través del complejo 
   receptor para el
[18:29] <MIzquierd> antígeno (TCR)/CD3 conduce a la activación o, en ciertas 
   condiciones, a la
[18:29] <MIzquierd> apoptosis inducida por activación. Ambos procesos 
   implican una activación
[18:29] <MIzquierd> de la expresión génica que requiere transcripción de novo 
   y traducción
[18:30] <MIzquierd> ("fase de programación"), seguida de una "fase efectora", 
   que puede
[18:30] <MIzquierd> conducir bien a proliferación celular o hacia apoptosis. 
[18:30] <MIzquierd> El control de
[18:30] <MIzquierd> ambas respuestas es fundamental para el mantenimiento de 
   la homeostasis en
[18:30] <MIzquierd> la respuesta inmune. En este estudio nos proponemos 
   establecer en un modelo
[18:30] <MIzquierd> de línea linfoide T humana los mecanismos moleculares 
   responsables del
[18:30] <MIzquierd> balance entre activación y apoptosis. 
[18:31] <MIzquierd> La participación del sector empresarial contribuiría 
[18:31] <MIzquierd> a la determinación de los mecanismos y los mediadores 
   implicados 
[18:31] <MIzquierd> en la inducción de muerte celular por nuevas drogas,
[18:31] <MIzquierd> así como en la posible actividad immunomoduladora de las 
   mismas. 
[18:31] <MIzquierd> La aplicación potencial del proyecto derivaría de la 
   determinación de las
[18:31] <MIzquierd> señales y mediadores intracelulares implicadas de forma 
   diferencial entre
[18:31] <MIzquierd> activación/proliferación y apoptosis, lo que permitiría 
   intervenir
[18:31] <MIzquierd> farmacológicamente y/o genéticamente de forma selectiva 
   en ambos procesos.
[18:32] <MIzquierd> BIBLIOGRAFIA COMENTADA
[18:32] <MIzquierd> 1. S. Nagata, Cell 88, 355-365 (1997).
[18:32] <MIzquierd> Revisión  sobre la contribución de apoptosis al 
   desarrollo del
[18:32] <MIzquierd> sistema immune.
[18:33] <MIzquierd> 2. M. Izquierdo, D. A. Cantrell, Trends Cell Biol. 2, 
   268-271 (1992).
[18:33] <MIzquierd> Revisión sobre activación del linfocitos T.
[18:33] <MIzquierd> 3. D. Kabelitz, T. Pohl, K. Pechhold, Immunol. Today 14, 
   338-339 (1993).
[18:33] <MIzquierd> Revisión donde se utiliza por primera vez el término
[18:33] <MIzquierd> "activation-induced  cell death "para 	referirse a la 
   muerte de linfocitos
[18:33] <MIzquierd> inducida a través del TCR.
[18:33] -Samwise- Transmision de izdo.txt finalizada |
[18:34] <MIzquierd> 4. G. J. Nossal, Cell 76, 229-39 (1994).
[18:34] <MIzquierd> Revisión donde se explica el concepto de selección 
   negativa en
[18:34] <MIzquierd> linfocitos.
[18:34] <MIzquierd> 5. S. Nagata, T. Suda, Immunology Today 16, 39-42 (1995).
[18:34] <MIzquierd> Se revisan las consecuencias que  tiene en la homeostasis 
   del
[18:34] <MIzquierd> sistema immune  los defectos en	AICD  mediante el 
   análisis de las
[18:35] <MIzquierd> mutaciones espontáneas  lpr y gld en ratón.
[18:35] <MIzquierd> 6. B. Wong, Y. Choi, Current Opinion in Immunology 9, 
   358-364 (1997).
[18:35] <MIzquierd> 7. K. M. Latinis, et al., J Immunol 158, 4602-11 (1997).
[18:35] <MIzquierd> Se describe  la participación de ras en la regulación del 
   gen de
[18:35] <MIzquierd> FasL tras estimulación del TCR.
[18:36] <MIzquierd> 8. M. Izquierdo, M. C. Ruiz-Ruiz, A. López-Rivas, J. 
   Immunol. 157,
[18:36] <MIzquierd> 21-28 (1996).
[18:36] <MIzquierd> Se describe la contribución del recambio de fosfolípidos 
   de
[18:36] <MIzquierd> inositol y el calcio intracelular a la regulación del gen 
   FasL y AICD.
[18:36] <MIzquierd> 9. S. Nagata, P. Golstein, Science 267, 1449-1456 (1995).
[18:36] <MIzquierd> Revisión general sobre apoptosis en linfocitos. y del 
   sistema Fas/
[18:37] <MIzquierd> FasL.
[18:37] <MIzquierd> 10. J. Downward, J. D. Graves, P. H. Warne, S. Rayter, D. 
   A. Cantrell,
[18:37] <MIzquierd> Nature 346, 719-723 (1990).
[18:37] <MIzquierd> Descripción original de la activación de ras tras 
   estimulación del TCR.
[18:37] <MIzquierd> 11. J. D. Graves, et al., J. Immunol. 146, 3709-3712 
   (1991).
[18:38] <MIzquierd> 12. J. D. Graves, et al., J. Immunol. 148, 2417-2422 
   (1992).
[18:38] <MIzquierd> Los dos últimos trabajos describen las señales 
   extracelulares que
[18:38] <MIzquierd> regulan la activación de ras en linfocitos T.
[18:38] <MIzquierd> 13. M. Izquierdo, M. Woodrow, D. Cantrell, Cancer Surveys 
   22, 75-83 (1995).
[18:38] <MIzquierd> 14. M. Izquierdo, S. J. Leevers, C. Marshall, D. A. 
   Cantrell, J. Exp.
[18:39] <MIzquierd> Med. 178, 1199-1208 (1993).
[18:39] <MIzquierd> 15. M. Izquierdo, S. Bowden, D. A. Cantrell, J. Exp. Med. 
   180, 401-404
[18:39] <MIzquierd> (1994).
[18:39] <MIzquierd> 16. M. Izquierdo, K. Reif, D. A. Cantrell, Immunol. Today 
   16, 159-164
[18:39] <MIzquierd> (1995).
[18:40] <MIzquierd> Los cuatro trabajos últimos describen y revisan la 
   contribución de
[18:40] <MIzquierd> ras al proceso de activación de linfocitos T.
[18:40] <MIzquierd> 17. K. M. Latinis, L. A. Norian, S. L. Eliason, G. A. 
   Koretzky, J Biol
[18:40] <MIzquierd> Chem 272, 31427-34 (1997).
[18:40] <MIzquierd> Descripción de la contribución de los sitios NFAT del 
   promotor de
[18:40] <MIzquierd> FasL  a su regulación 	transcripcional tras estimulación 
   del TCR.
[18:41] <MIzquierd> 18. C. Friesen, I. Herr, P. H. Krammer, K.-M. Debatin, 
   Nature Medicine
[18:41] <MIzquierd> 2, 574-577 (1996).
[18:41] <MIzquierd> Primera observación sobre la contribución del sistema 
   Fas/FasL a
[18:41] <MIzquierd> la apoptosis inducida con antitumorales
[18:41] <MIzquierd> 19. M. Müller, et al., J. Exp. Med. 188, 2033-2045 (1998).
[18:42] <MIzquierd> 20. S. Kasibhatla, et al., Mol Cell 1, 543-51 (1998).
[18:42] <MIzquierd> Trabajos cuyas conclusiones apoyan los resultados 
   expuestos en la
[18:42] <MIzquierd> ref. nº 18.
[18:42] <MIzquierd> 21. M. C. Ruiz-Ruiz, A. López-Rivas, Cell death and 
   Differentiation 6,
[18:42] <MIzquierd> 271-280 (1999).
[18:42] <MIzquierd> Trabajo que argumenta en contra de la contribución del 
   sistema
[18:42] <MIzquierd> Fas/FasL a  la apoptosis inducida con antitumorales en 
   líneas de
[18:43] <MIzquierd> tumores sólidos
[18:43] <MIzquierd> 22. D. W. Nicholson, N. A. Thornberry, TIBS. 22,  299-306 
   (1997).
[18:43] <MIzquierd> Revisión sobre la contribución de caspasas en la 
   apoptosis inducida
[18:43] <MIzquierd> por diversos estímulos.
[18:43] <MIzquierd> 23. D. M. Desai, M. E. Newton, T. Kadlecek, A. Weiss, 
   Nature 348, 66-69
[18:44] <MIzquierd> (1990).
[18:44] <MIzquierd> Descripción de los efectos funcionales en activación de 
   linfocitos
[18:44] <MIzquierd> T del receptor 	muscarínico.
[18:44] <MIzquierd> 24. M. A. Goldsmith, D. M. Desai, T. Schultz, A. Weiss, 
   J. Biol. Chem.
[18:44] <MIzquierd> 264, 17190-17197 (1989).
[18:44] <MIzquierd> Primera descripción  del receptor HM1R en células Jurkat.
* Play queue has been cleared
> 4 eso es todo, muchas gracias 
[18:45] <MIzquierd> Dr.Manuel Izquierdo Pastor
> a ver, ruegos y preguntas ??
[18:45] <MIzquierd> Científico Titular CSIC. Instituto de Biología y Genética 
   Molecular
[18:45] <mfuentes> ¡la leshe! :-)
[18:45] <MIzquierd> Facultad de Medicina. CSIC-Universidad de Valladolid
[18:45] <Samwise> que lo traduzcan?
[18:45] <MIzquierd> 4 dudas ?
[18:46] <mfuentes> ¡jo! Primero habrá que leerselo despacio...
[18:46] <MIzquierd> a ver.... han entendido todo??
[18:46] <federico> eso digo yo
[18:46] <MIzquierd> iba despacito no?
[18:46] <mfuentes> Si, pero es muy denso
[18:46] -MJesus- Conoces a pask
[18:46] <MIzquierd> bueno..... prefieren hacer las preguntas por mail??
[18:47] <mfuentes> Será mejor...
[18:47] <MIzquierd> mizdo@ibgm.uva.es
[18:47] <MIzquierd> entonces podemos irnos....... ??
[18:47] <mfuentes> Si. Muchas gracias por todo.
[18:47] <federico> le damos permiso
[18:47] <federico> gracias
[18:48] <MIzquierd> a ustedes!!!
[18:49] <MIzquierd> es que debo coger un tren a valladolid...
[18:49] <MIzquierd> bueno estoy a su disposicion en ese mail
[18:49] <MIzquierd> hasta la vista!!
[18:49] *** MIzquierd (mjcoma@inv-pc16.hgy.es) has left #curso